Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной среды № 8, перемешивают и инкубируют при температуре 30-35°С в течение 24 - 48 часов. Делают пересев на чашку с плотной питательной средой №10 и инкубируют при температуре 30-350С от 18 до 48 часов. Рост золотисто-желтых колоний, окруженных желтыми зонами (что свидетельствует о ферментации маннита), указывает на возможность загрязнения лекарственного средства S. aureus. В этом случае подозрительные колонии пересевают на скошенную плотную среду №1, инкубируют при температуре 30-350С в течение 18-24 часов. Выросшие колонии микроскопируют и, при выявлении грамотрицательных кокков, расположенных гроздьями, проводят тест на наличие фермента плазмокоагулаза.
# Тест на наличие плазмокоагулазы (реакция плазмокоагуляции) Кровь, взятую стерильным шприцем из сердца кролика, помещают в 5 % стерильный раствор натрия цитрата, отсасывают плазму, разводят 1:5 0,9% стерильным раствором натрия хлорида изотоническим и разливают по 0,5 мл в стерильные пробирки. В каждую пробирку помещают 1 петлю суточной культуры стафилококка и инкубируют при температуре от 30 до 35°С в течение 4 - 6 часов. Если в течение этого времени не наблюдают свертывание плазмы, реакцию плазмокоагуляции считают отрицательной. Обязательно наличие двух контролей: 1) контроль рас-
твора плазмы, 2) контроль культуры стафилококка, обладающего ферментом коа-гулазой.
# Допускается использовать сухую кроличью цитратную плазму промышленного производства, которую разводят согласно наставлению по применению.
# Если в образце обнаружены грамположительные кокки, которые ферментируют маннит и дают положительную реакцию плазмокоагуляции, лекарственное средство контаминировано Staphylococcus aureus
Клостридии
Нижеописанные испытания проводят в различных целях. Первый метод предназначен для тех случаев, когда важным является исключение патогенных клостридий, и необходимо провести испытание на их отсутствие. Эти продукты обычно содержат небольшое общее количество микроорганизмов. Второй метод представляет собой полуколичественное определение Clostridium perfringens, и предназначен для продуктов, в которых количество этих микроорганизмов является критерием качества.
1. Испытание на клостридии. Готовят испытуемый продукт, как описано в разделе 2.6.12. Отбирают две равные порции, соответствующие 1 г или 1 мл продукта. Одну из порций нагревают при 800С в течение 10 минут и быстро охлаждают. Другую порцию не нагревают. По 10 мл каждой из гомогенизированных порций переносят в две пробирки (38х200 мм) или в другие подходящие контейнеры, содержащие 100 мл среды Р. Инкубируют в анаэробных условиях при 35-370С в течение 48 часов. После инкубации делают пересев из каждой пробирки на среду Q с добавлением гентамицина и инкубируют в анаэробных условиях при 35-370С в течение 48 часов. Если роста микроорганизмов не наблюдается, продукт выдерживает испытание.
При наличии роста делают пересев каждой отдельной колонии на питательную среду Q без гентамицина и инкубируют как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Наличие только анаэробного роста грамположительных палочек (с эндоспорами или без них), дающих отрицательную реакцию на каталазу, указывает на присутствие Clostridium spp. При необходимости сравнивают морфологию колоний на двух чашках и проводят испытания на каталазу для исключения аэробных и факультативно анаэробных Bacillus spp, дающих положительную реакцию на каталазу. Это испытание может применяться к изолированным колониям на агаре или после их переноса на предметное стекло, путем добавления капли разбавленного раствора пероксида водорода R. Образование пузырьков газа является признаком положительной реакции на каталазу.
2. Количество Clostridium perfringens. Используя продукт, подготовленный в соответствии с указаниями раздела 2.6.12, готовят разведения в соотношениях 1:100 и 1:1000 в буферизированном растворе хлорида натрия и пептона рН 7,0. Определяют наиболее вероятное число бактерий, как описано в разделе 2.6.12, используя питательную среду R в пробирках или других подходящих контейнерах с помещенной внутрь маленькой трубкой Дюрама. Перемешивают при минимальном встряхивании и инкубируют при 45,5-46,50С в течение 24-48 часов. Наличие в пробирках черного окрашивания, вызванного образованием сульфида железа, и сильного газообразования в трубках Дюрама (не менее 1/10 объема) указывает на присутствие Cl. perfringens. Наиболее вероятное количество C. рerfringens оценивают с использованием Таблицы 2.6.13.-2.
Таблица 2.6.13.-2
Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий
Три пробирки для кажд ого уровня разведения
Количество пробирок с на НВЧ Категория* Пределы 95% до
блюдаемым ростом микроор в 1 г верительного ин
ганизмов тервала
0,1 г 0,01 г 0,001 г 1 2
